E. D. מיצה, ל. יו. קוקאייבה, ס.נ. אלנסקי
Oomycete פיטופתורה תינוקות (מונט) דה בארי גורם לדלקת מאוחרת, מחלה מסוכנת של תפוחי אדמה ועגבניות. אחד המקורות העיקריים לחיסון ראשוני פ אינפסטאנים הם מבני רבייה מנוחים עבותי דופן - oospores.
אובוספורות היברידיות הנובעות ממעבר של זנים הוריים שונים מבחינה גנטית תורמות לעלייה במגוון הגנוטיפי באוכלוסייה, וכתוצאה מכך מואץ תהליך התאמת הזנים לזנים חדשים וקוטלי פטריות מיושמים.
היווצרות Oospore פ אינפסטאנים בתחום צוין במדינות רבות בעולם: רוסיה (Smirnov et al., 1999), נורווגיה (Hermansen et al., 2002), שבדיה (Strömberg et al., 2001), הולנד (Kessel et al., 2002) ואחרים. אזורים. Oospores מסוגלים להתמיד באדמה במצב בר קיימא במשך יותר משנתיים (Bødker et al., 2) ולגרום לזיהום בצמחים לאחר חורף יתר (Ulanova et al., 2006; Lehtinen et al., 2010).
מוקדם יותר הוצג כי עלים של צמחים בעלי שכבות שונות של שיח תפוחי האדמה הם בעלי עמידות בפני דלקת מאוחרת; הוא גדל מהעלים התחתונים לעליונים. נטייה זו אינה תלויה בגיל העלים, גיל הצמח או מגוון תפוחי האדמה (Vesper et al., 2003). יחד עם זאת, לא הצלחנו למצוא נתונים על ההבדלים בעוצמת היווצרות האוספורה בעלים של שכבות שונות של שיח תפוחי האדמה בספרות. עם זאת, אם קיימים הבדלים כאלה, יש לקחת אותם בחשבון בעת לקיחת דגימות עלים לניתוח היווצרות אוספורות וכאשר מפרשים את התוצאות שהתקבלו על ידי מחברים אחרים. מטרת העבודה הזו הייתה לחקור היווצרות אוספורות בעלים מנותקים של שכבות שונות של צמח תפוחי אדמה שהונחו באותם תנאים בתאים לחים.
חומרים ושיטות
השתמשנו ב -5 מבודדים פ אינפסטאנים סוגים שונים של הזדווגות מבודדים מדגימות מושפעות שהובאו מאזורי מוסקבה, ריאזאן ולנינגרד. מהם נבחרו 3 זוגות של זנים מסוגים שונים של הזדווגות, מה שמעניק שפע של oospores בבדיקה במדיום שיבולת שועל אגר.
לבדיקה השתמשנו בצמחי תפוח אדמה נטולי וירוסים מהזנים הבאים שגדלו בחממה (במצע כבול): סנדרין מוקדמת, זוראצ'קה, אולדר, אוזיריס, אמצע תחילת אילינסקי, יאנקה באמצע העונה.
עלים פשוטים מרמות שונות של צמח תפוחי האדמה נבחרו לניתוח. שלושה עלים נבחרו מהמפלס התחתון (4 עלים מורכבים תחתונים), שלושה מלמעלה (3-4 עלים מורכבים מלמעלה), ושלושה עלים ממרכז השיח. עלים פשוטים נשקלו, צולמו על נייר קואורדינטות (לחישוב הנפח והשטח) ואז הונחו הפוך על פני המים הסטריליים, שפכו 25 מ"ל לכלי פטרי. ואז כל עלה נדבק בטיפה אחת של מתלה מעורב של מבודדי zoosporangia A1 ו- A2 מסוג ההזדווגות. במשך שלושה עלים שנאספו מכל רמה, נעשה שימוש בחיסון של שלושה זוגות מבודדים שונים. עלה אחד נדבק בתערובת חיסון של זוג בודדים אחד.
כדי להכין השעיה של זואוספורנגיה, גודלו מבודדים מסוגי הזדווגות שונים על מדיום שיבולת שועל אגר במשך 7 ימים, ולאחר מכן נשטפו הזואוספורנגיה במים מזוקקים סטריליים. ריכוז החיסון היה 5-7 זואוספורות בשדה הראייה של המיקרוסקופ בהגדלה פי 80. כל עלה היה מזוהם בטיפה אחת של מתלה מעורב של סוג הזיווג A1 ו- A2 מבודד zoosporangia.
בכל הניסויים, נעשה שימוש ב -3 עלי תפוחי אדמה בכל גרסה. לאחר דגירה במשך 20 יום ב 18 מעלות צלזיוס, כל עלה הומוגני במכתש עם 2 מ"ל מים מזוקקים. מההשעיה שהתקבלה נלקחו 3 דגימות, מהם הוכנו תכשירים למיקרוסקופיה.
בכל גרסה נבדקו 180 שדות ראייה, ולאחר מכן חושב מחדש מספר האוספורות לכל 1 מ"מ2 משטח הסדין. תוצאות הספירה עבור כל גרסה היו ממוצעות.
כדי לחשב את מרווח הביטחון (μ) לרמת מובהקות של 0,05, נעשה שימוש בנוסחה הבאה
כאשר s הוא סטיית התקן, n הוא מספר המדידות, t הוא קבוע הבדיקה t לרמת מובהקות של 0,05. כל החישובים בוצעו באקסל (חבילת Microsoft Office).
תוצאות ודיון
חיסון של עלים שנאספו משכבות שונות של שיח תפוחי אדמה והונח באותם תנאים בתאים לחים גילה הבדלים בעוצמת היווצרות האוזפור. בכל הזנים שנחקרו נוצר המספר המרבי של האוספורות במהלך חיסון של עלים שנאספו מהשכבה התחתונה והאמצעית של השיח. לא נמצאו הבדלים משמעותיים ביצירת אוספורות בעלים התחתונים והאמצעיים.
המספר המינימלי של oospores נוצר בעלים של השכבה העליונה (איור 1).
בעלים של השכבות התחתונות והאמצעיות נוצר המספר המרבי של אוספורות בזנים סנדרין, אילינסקי, זוראצ'קה, אולדר ואוזיריס. הם נוצרו בצורה מעט פחות אינטנסיבית בעלים של זן הינקה. המספר המרבי של oospores בעלים של השכבה העליונה נצפה בעלים של הזן Uladar, ואחריו Zorachka, Osiris, Yanka, Ilyinsky, Sandrin בסדר יורד. עם זאת, לא כל ההבדלים היו מובהקים סטטיסטית.
דמות: 1. היווצרות של oospores בעלים של שכבות שונות של שיח תפוחי האדמה. התחתונים הם העלים של שלוש המפלסים התחתונים של השיח, העליונים הם 3-4 עלים מורכבים מראש הצמח, האמצעיים הם מאמצע השיח.
פסי שגיאה מציגים את רווח הביטחון לרמת מובהקות של 0,05.
בשטח, תנאים מיקרו אקלימיים תורמים גם להיווצרות אוספורות בעלים התחתונים והאמצעיים של השיח: לחות גבוהה יותר, בידוד סולארי מופחת ותנודות טמפרטורה יומיות (הריסון, 1992). ריסוס עליון מביא לפחות חומרי הדברה בתחתית השיח ובמרכזו. כדי להפחית את היווצרותם של oospores, יש להשתמש בטכנולוגיות המאפשרות להעביר בהצלחה קוטלי פטריות לחלקים התחתונים והאמצעיים של השיח. ניתן להשיג תוצאות טובות באמצעות מרססי אוויר סוערים וקוטלי פטריות מערכתיים שיכולים להתפשט לחלקים הבלתי מטופלים של השיח.
עבודה זו נתמכה על ידי קרן המדע הרוסית (פרויקט מס '14-50-00029).
המאמר פורסם בכתב העת "הגנה על תפוחי אדמה" (מס '2, 2015)